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      Bio-techne|Luminex 微球數量太少?這三點一定要注意

      提及多因子的定量檢測,越來越多的小伙伴會第一個想到 Luminex 技術。Luminex 基于微球設計原理,可以在 1 張 96 孔板中定量檢測多達 100 種分析物,僅需少量樣本,節約時間、經費,可謂一舉多得。

      R&D Systems® 擁有 Luminex Assay 以及 Luminex High Performance Assay 兩個產品系列,均基于帶有顏色編碼的微球,這些微球表面包被了識別不同目標分析物的特異性抗體。當預包被的微球與待檢樣本孵育時,分析物被微球捕獲,經由生物素標記的特異性檢測抗體混合物識別,加入鏈霉親和素 - PE 熒光素底物后發光并進行定量檢測。

      01  樣品粘稠,未有效稀釋
      解決方法:測定前,如果是凍存的血清 / 血漿樣品,第一步需將樣品充分解凍(如果樣本包含碎片的話也會影響數據的讀?。?。建議在加樣前,將樣本進行 16,000 x g 離心 4 分鐘,特殊情況下可能要離心更長的時間,再用 Calibrator diluent 按照建議的稀釋比對樣本進行稀釋。

      02  進樣針孔堵塞,進樣針高度不正確
      解決方法:以上兩種情況都會導致沒有充足的微球進入,前者需用超聲的方法清洗針孔,如有需要進行替換;后者需確定進樣針的高度并調整至合適位置。

      也可以進入維護頁面,點擊 Cmds&Routines,使用 0.1 N NaOH 運行深度清洗。

      03  操作有誤,清洗步驟中孔板未附磁力架
      解決方法:這是新手常常會出現的失誤。對于磁珠形式的微球,切記清洗時整個過程都要附有磁力架,確定磁力架正確地結合在微孔板上,洗板時磁力架應置于微孔板底部,棄去洗滌液前應靜置 1 分鐘。不要吸干,以防止磁珠丟失。

      如果磁珠數量少,建議最好不要用自動洗板機清洗,我們發現自動洗板機清洗可能會造成磁珠聚集,從而影響其數量。

      ?在實際的 Luminex 實驗操作中,有客戶經常碰到微球數少于 50 個甚至只有幾個的問題,極大地影響了實驗結果,其可能的原因和解決方法有哪些呢?

       

      如下為正確的手動洗板方式:

       

      除了上述三點外,還要一些細節需要注意

      ●確保儀器已正確校準,建議每周進行儀器校準,每天驗證一次。若儀器使用頻率不高,則需要在每次實驗前進行校準和驗證;

      ●在實驗當天使用驗證試劑盒確定儀器功能運行正常;

      ●設定微球收集數(events/microparticle)為 50,并選擇正確的微球類型(通常為磁珠),保證微球數量收集充分以獲得準確的統計學結果;

      ●使用 0.12" orbit(3mm 軌道半徑)水平微孔板振蕩器,確保振蕩器速度符合說明書要求。

       

      以上文字和圖片來源于Bio-techne

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