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      Bio-techne|IHC/ICC/IF 抗體哪家強?適用范圍早知道

      免疫組織化學(IHC)、免疫細胞化學(ICC)和免疫熒光(IF),姑且稱為定位檢測抗原表達的「三駕馬車」,是生物學研究中常用的免疫學實驗。

      三種方法原理相似,易于混淆。實驗人員在挑選抗體產品時常常有這樣的困惑,某一種應用的抗體是否也適用于另外兩種實驗?是,也不是。具體要視不同品牌而定,下面讓我們為您一一解惑:

      「三駕馬車」的應用有何不同?

      首先,我們一起了解下三種檢測方法的區別。IHC 應用的樣本類型是組織,ICC 的樣本類型是細胞,而 IF 則是采用熒光標記抗體實現組織/細胞中目的蛋白的定位。其中,IHC 更可以根據組織切片的形式分為 IHC-P(石蠟切片)及 IHC-Fr(冰凍切片)。

      Bio-Techne 的抗體產品選擇的特別之處在于,不會顯示單獨的 IF 應用,而是與 ICC 合并為一類:ICC/IF。因而,涉及三種檢測方法的應用標識主要分為:ICC/IF,IHC(IHC-P、IHC-Fr)。

      左上,IHC:使用 HIF-1 alpha 抗體(Novus,NB100-105)在人腎臟中染色 HIF-1 alpha;右上,ICC:使用 10 µg/mL IRAK4 抗體(Novus,NBP1-77231)和 HRP 偶聯的二抗在 K562 細胞中檢測到 IRAK4 的表達。細胞用 DAB 染色(棕色),細胞核用蘇木精(藍色)復染。左下,基于組織的 IF:使用 1 μg/mL 的 GAP-43 抗體(Novus,NB300-143)及 AlexaFluor® 488 標記的二抗,檢測 E15.5 小鼠胚胎的石蠟切片中 GAP-43 的表達。DAPI 用于細胞核復染;右下,基于細胞的 IF:使用 15 µg/mL 的 IRAK4 抗體(R&D Systems,AF3919)及 NorthernLights™ 557 偶聯的二抗(紅色)在 THP 1 細胞中檢測 IRAK4。用 DAPI(藍色)對細胞核進行染色。

       

      如何挑選合適的 IHC/ICC/IF 抗體?

      在了解三種檢測方法的差別之后,我們回到文章開頭的問題,一種抗體是否可以在三種檢測方法中通用?換句話說,如何挑選適用于自身實驗的抗體呢?

      Bio-Techne 旗下兩大抗體品牌 R&D Systems® 與 Novus Biologicals®,在抗體的適用范圍(IHC/ICC/IF)描述方面存在差異:

      1. R&D Systems® 品牌的抗體在產品頁面顯示已經驗證的種屬(Species)及應用 (Applications),這些應用通常在說明書中會有詳細的信息。

      [特別注意] R&D Systems® 品牌抗體應用中 IHC 或者 ICC/IF 只要有一項,則可以適用于 IHC 及 ICC/IF 的應用。一般來說,應用中包含「IHC」的抗體同時適用于 IHC-Fr 及 IHC-P,除非說明書中另有聲明。

      例如,巨噬細胞標志物 CD68(貨號 MAB20401)抗體,應用欄中僅標出了 ICC/IF,雖然不能確定一種抗體在每一種組織中都有同樣的表現,但我們可以證明其對固定抗原的識別,所以也可應用于 IHC 實驗。


      溫馨提示:若說明書中沒有 IHC 以及 ICC/IF 的應用說明,表明我們沒有任何數據來支持相應的應用,即不能保證實驗結果。 

      2. 同樣的,Novus Biologicals® 抗體產品頁面也顯示出所有經過驗證的種屬(Species)及應用 (Applications)。值得一提的是,除 Novus Biologicals® 實驗室驗證的種屬及應用外,部分數據也來自于客戶的鼎力支持。

      除此之外,還有些抗體包含 (-) 標志,代表驗證過為陰性的種屬或者應用,不建議您再次進行嘗試。

      [特別注意] Novus Biologicals® 的 IHC 與 ICC/IF 兩種應用不能通用,這一點與 R&D Systems® 的規定有所不同。此外,若有單獨標注 IHC 的子類(IHC-Fr、IHC-P 或 IHC-Whole Mount),只驗證用于單獨標注的子類,如果只有 IHC 標志而無子類標志,則適用于所有的 IHC 切片類型。即:

      • 抗體 A 標注了 IHC,則可以應用于 IHC-P、IHC-Fr,未驗證 ICC/IF;
      • 抗體 B 標注了 IHC,IHC-Fr,則可以應用于 IHC-Fr,未驗證 IHC-P 及 ICC/IF;
      • 抗體 C 標注了 ICC/IF,則可以應用于 ICC/IF,未驗證 IHC-P 及 IHC-Fr。

       

      以自噬標志物 LC3B(NBP2-46892)為例,應用欄中標出了 ICC/IF,IHC,IHC-P,說明此產品已驗證適用于 ICC/IF 和 IHC-P,未驗證 IHC-Fr 實驗。

      根據品牌的不同,可以選擇合適的官方驗證過的抗體。謹記上述小貼士,開展實驗不用愁。

       

       

      以上文字和圖片來源于Bio-techne

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